基本原理和用途

PI（碘化丙啶）是一種核酸染色劑，它能夠與DNA和RNA結(jié)合并發(fā)光。PI染色通常用于區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞，因?yàn)樗荒艽┩竿暾募?xì)胞膜，但可以染色細(xì)胞膜受損的死細(xì)胞。在流式細(xì)胞儀分析中，常被用來檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜的變化，會吸收PI并發(fā)出紅色熒光，而活細(xì)胞則不會被染色。

實(shí)驗(yàn)步驟

 1.樣本準(zhǔn)備：

    1.1收集懸浮細(xì)胞或用yidanbaimei消化貼壁細(xì)胞以制備單細(xì)胞懸液。

    1.2對于新鮮實(shí)體組織，清洗后剪碎并用酶消化，然后過濾以分離組織和細(xì)胞。

    1.3石蠟切片組織需脫蠟、水化后，用酶消化以分離細(xì)胞。

  2.固定：

     將準(zhǔn)備好的單細(xì)胞懸液用70%乙醇固定，并在4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

  3.染色：

    3.1使用RNA酶A處理固定的細(xì)胞，以消化RNA，避免其與PI結(jié)合產(chǎn)生背景信號。

    3.2加入PI染液，通常包含PI和適量的Triton X-100（用于滲透細(xì)胞膜），在4℃下避光孵育30分鐘。

  4.上機(jī)檢測：

    使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，激發(fā)波長為488nm，記錄紅色熒光信號。

  5.結(jié)果觀察：

    分析PI的紅色熒光強(qiáng)度，以定量死亡細(xì)胞的比例。在細(xì)胞周期分析中，可以根據(jù)DNA含量的不同來區(qū)分細(xì)胞在G0/G1、S和G2/M階段。

請注意，這些步驟可能需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和細(xì)胞類型進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。在操作過程中，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩胧?，因?yàn)镻I是一種潛在的致癌物質(zhì).

在細(xì)胞培養(yǎng)和組織學(xué)中的應(yīng)用

在細(xì)胞培養(yǎng)中，PI染色可以用來監(jiān)測細(xì)胞毒性和藥物對細(xì)胞增殖的影響。通過染色，研究人員可以評估細(xì)胞在處理后的存活率和細(xì)胞周期的變化。在組織學(xué)中，可以用于標(biāo)記壞死細(xì)胞，幫助研究組織損傷和疾病過程中的細(xì)胞死亡。

注意事項(xiàng)和實(shí)驗(yàn)技巧

在進(jìn)行染色時(shí)，需要注意PI的毒性和潛在的致癌性，因此應(yīng)在通風(fēng)良好的環(huán)境中操作，并采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。此外，染色過程中應(yīng)避免光照，因?yàn)镻I對光敏感，可能會降解。在流式細(xì)胞儀分析時(shí)，應(yīng)調(diào)整適當(dāng)?shù)臒晒庋a(bǔ)償和電壓設(shè)置，以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。