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  • 2022

    5-14

    人胰腺癌裸小鼠模型實驗方法原理將人胰腺癌細胞株8988接種于裸鼠腋窩處皮下,每周測量腫瘤大小,第42d處死小鼠。腫瘤組織及相關臟器送病理及電鏡檢查,放射免疫法檢測相關抗原。皮下腫瘤組織細胞及細胞株培養(yǎng),HE染色。實驗材料裸小鼠BALBcnu-nu胰腺癌細胞株8988試劑、試劑盒RPMI-1640*培養(yǎng)基胰酶戊二醛儀器、耗材CO2培養(yǎng)箱試管實驗步驟一、實驗材料準備裸小鼠BALB/cnu-nu,4~6周齡,體重16~20g,雌雄兼?zhèn)?,SPF級環(huán)境中飼養(yǎng),恒溫25~27℃,恒濕45...

  • 2022

    5-7

    試劑、試劑盒Taq聚合酶溶于水的DNA引物儀器、耗材熱循環(huán)儀實驗步驟一、材料1.酶和酶緩沖液Taq聚合酶許多Taq聚合酶都可以用;作者發(fā)現(xiàn)Roche公司的Taq聚合酶可以滿足大多數(shù)需要.如果需要提高PCR產(chǎn)物的特異性,應該使用熱啟動聚合酶。使用Tag聚合酶本身附帶的緩沖液。2.核酸和寡核苷酸(1)溶于水的DNA如果DNA在TE中,應該在PCR反應混合物中添加MgCl2.如果用從石蠟包埋的組織中純化的DNA做模板,選擇的STR標記的大小應該是78~250bp,因為這些DNA模板...

  • 2022

    5-7

    免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié):1、冰凍切片制備:建議用新鮮組織,否則組織細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞,易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等,防止裂片和脫片嚴重。2、組織切片固定:切好片風干后立即用冰丙酮等固定液進行固定5-10min,尤其要較長時間保存的白片,一定要及時固定和適當保存。3、血清封閉:為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合,需要在一抗孵育前先用血清(與二抗來源一致)封閉,減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調(diào)整的,一般10-30min。4、一抗孵育條件:在免疫組化反...

  • 2022

    5-7

    免疫熒光標記技術(immunofluorescencetechnique)是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測出抗原或抗體。實驗材料組織樣品試劑、試劑盒PBS抗體儀器、耗材玻片加濕盒實驗步驟1.將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒,由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片,放入玻片盒中(每邊放6片),或故濕盒中(載玻片勿相互接觸)。2.待載玻片達室濕且未干...

  • 2022

    5-7

    一.細胞復蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細胞于37℃水浴,快速溶化,用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細胞懸液,于1500轉(zhuǎn)/分,離心3分鐘。棄上清,再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細胞沉淀,再1500轉(zhuǎn)/分,離心3分鐘,棄上清,細胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻,備用。另取一個75cm2方瓶,加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì),將上述制備的含腫瘤細胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中,于37℃,5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細胞懸浮生長,大約3-4天細胞基質(zhì)會變黃,5.0ml細胞懸液可傳代...

  • 2022

    5-7

    免疫熒光標記技術(immunofluorescencetechnique)是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測出抗原或抗體。實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒多聚-L-賴氨酸儀器、耗材離心機培養(yǎng)箱實驗步驟1.細胞在冰浴中冷卻,然后用臺式離心機于4℃以800g離心5min,吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS重懸細胞。2.離心吸去PBS,以1~2ml2%PFA固定液,...

  • 2022

    4-30

    進行實驗動物灌流是獲得良好的形態(tài)學觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對于未經(jīng)訓練的實驗人員,初次進行灌流可能會失敗,故建議首先用一些對照實驗動物練習,以熟悉此過程。基本方案實驗材料小鼠試劑、試劑盒PBS儀器、耗材23-G針頭注射管解剖器械實驗步驟1.一支針管吸滿1×PBS,另一支吸4%PFA固定液(4℃),擱置待用。2.在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后,立刻背朝下放平小鼠,小心剖開胸腔防止過多出血,小心并迅速切開肋骨,剪去橫隔膜,暴露心臟。3.小心將吸...

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